|
Способность NO-содержащего газового потока (NO-СГП) ускорять раневое заживление требует изучения механизмов этого эффекта. Морфологические данные говорят об ускорении пролиферации фибробластов, эндотелиоцитов и эпителиальных клеток, синтеза коллагена. Однако остается открытым вопрос о том, воздействует ли экзогенный NO на размножение и функции фибробластов непосредственно или только опосредованно – через нормализацию микроциркуляции, активацию цитокинов и т.д.
Фибробласты кожи человека и трансформированные глиальные клетки невриномы Гассерова узла крысы (НГУК 1) перевивали в пластиковых чашках Петри (диаметр 30 мм) и культивировали в среде RPMI 1640 и DMEM с 10% эмбриональной телячьей сывороткой соответственно до состояния плотного монослоя. Затем чашки с культурой клеток обрабатывали: 1) NO-СГП аппарата «ПЛАЗОН», содержащим 300 ppm оксида азота; 2) газовой смесью азота и NO из баллона с аналогичным содержанием NO; 3) воздушным потоком без NO (контроль). Время воздействия – 5, 10, 15 и 20 сек, по 4 чашки Петри на каждую временную точку. Всего проведено 3 серии опытов с разными пассажами клеток. Влияние экзогенного NO на синтез ДНК и белка оценивали по включению С14 – тимидина в ДНК и С14 - аминокислот в белки при их синтезе в культивируемых клетках через час после их обработки. Время мечения составляло 4,5 часа.
При воздействии NO-СГП на культивируемые фибробласты кожи человека в течении 15 сек выявлялось максимальное увеличение синтеза ДНК во всех сериях опытов в среднем на 223,3% по сравнению с контролем. Число клеток в чашках Петри после воздействия достоверно не менялось. При увеличении экспозиции воздействия до 20 сек синтез ДНК уменьшался, составляя в среднем 65,6% от контроля. При уменьшении экспозиции до 10 и 5 сек синтез ДНК не менялся или незначительно снижался по сравнению с контролем. Синтез белка фибробластами также максимально увеличивался при экспозиции 15 сек – в среднем 138,5% к контролю. Через 5 и 10 сек воздействия он практически не менялся (100,7% и 105,7% к контролю соответственно).
При воздействии на фибробласты газовым потоком смеси N2 и NO синтез ДНК при экспозиции в 10 и 15 сек увеличивался практически одинаково (до 166,0% и 167,5% соответственно), а через 20 сек воздействия уменьшался до 118,6% к контролю.
Использование в качестве объекта воздействия клеток невриномы Гассерова узла крысы выявило более слабую стимуляцию синтеза ДНК. При этом максимальное его увеличение определялось при экспозиции 10 сек (121,1%), через 15 сек синтез ДНК уменьшался до 110,5%, а через 20 сек – до 102,1% к контролю. Синтез белка был максимальным при 15-секундной экспозиции (152,2%) и снижался при уменьшении времени воздействия до 10 сек (98,5%) и увеличении его до 20 сек (82,2%). Число клеток невриномы в чашках Петри, как и фибробластов, под влиянием воздействия значимо не менялось.
Таким образом, полученные результаты свидетельствуют о том, что экзогенный NO после однократного обдувания культур фибробластов кожи человека и клеток невриномы способен заметно усиливать клеточную пролиферацию, повышая синтез ДНК в 2,5 раза и в меньшей степени (1,5 раза) увеличивать синтез белка клетками. Аналогичное действие наблюдается и при воздействии на клеточные культуры NO химического происхождения, что свидетельствует о том, что эффект не связан с другими факторами охлажденного воздушно-плазменного потока аппарата «ПЛАЗОН».
Версия для печати
|
